Tủ ấm phòng thí nghiệm, tủ sấy tiệt trùng dụng cụ, tủ ấm vi sinh

Tủ âm sâu -80 độ, tủ bảo quản mẫu sinh học, tủ bảo quản sinh phẩm

Khi nào tôi nên sử dụng gradient trong HPLC?

Thứ hai - 05/04/2021 23:12

Trong HPLC pha ngược, nên chạy một gradient kiểm tra nếu các điều kiện để phân tách thành công là không xác định. Quá trình chạy như vậy được thực hiện với khoảng 10-80% chất điều chỉnh hữu cơ trong 30-50 phút, sử dụng sự gia tăng tuyến tính về cường độ rửa giải. Dựa trên kết quả của gradient dò tìm này, có thể chọn chế phẩm pha động thích hợp để rửa giải đẳng dòng - Isocratic (phân tử nhỏ <1000 g / mol) hoặc gradien thích hợp để tách peptit hoặc các phân tử lớn hơn khác.

Rửa giải theo độ dốc cũng có thể được chọn để tách các hợp chất khác nhau rất nhiều về độ phân cực của chúng. Theo nguyên tắc chung, nếu các đỉnh có thể được phát hiện trong hơn 25% gradient dò tìm, rửa giải gradient có thể sẽ là lựa chọn tốt nhất cho vấn đề phân tách đó. Nếu các pic xuất hiện dưới 25% của gradient dò tìm thì nên ưu tiên rửa giải đẳng dòng, vì độ chọn lọc sẽ luôn cao hơn trong các điều kiện đẳng dòng.

Nếu mẫu bao gồm hai nhóm hợp chất riêng biệt, rửa giải từng bước có thể dẫn đến kết quả tách tốt. Trong trường hợp này, người ta bắt đầu với quá trình rửa giải pha động đẳng dòng tạo ra kết quả phân tách thỏa mãn cho nhóm hợp chất ít được giữ lại hơn, tiếp theo là tăng cường độ rửa giải của pha động theo một bước đến mức độ sẽ tách nhóm hợp chất được giữ lại nhiều hơn trong một cách thích hợp. Các chất chuyển màu cũng có thể được sử dụng để rửa cột sau mỗi lần tiêm. Trong trường hợp này, cường độ rửa giải tăng mạnh sau khi đỉnh cuối cùng đã rửa giải. Các tạp chất bị giữ lại mạnh sau đó có thể được loại bỏ khỏi cột.